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DA1023S DAPI染色液
 产品货号: DA1023S
 产品名称: DA1023S DAPI染色液
 产品价格/规格: 10ml 120元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2022-08-03
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  • DAPI染色液(DAPI Stain Solution,10 μg/ml

    ●  产品组成:

    组分货号

    名称

    规格

    贮存

    DA1023S

    DAPI染色溶液

    10 ml

    -20

     

    说明书

    一份

     

    ● 产品简介:

    DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是适用于常见细胞和组织细胞核染色的染色液。 DAPI2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride,也称DAPI dihydrochloride,分子式为C16H15N5• 2HCl ,MW为350.25,CAS Number 28718-90-3。

    DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。和EB(ethidium bromide)相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍,DAPI和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。 DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。 DAPI的最大激发波长为340nm,最大发射波长为488nm;DAPI和双链DNA结合后,最大激发波长为364nm,最大发射波长为454nm。 DAPI的发射光为蓝色,且DAPI和绿色荧光蛋白GFP或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发射波长仅有少部分重叠,可以利用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。

    本DAPI染色液为即用型,浓度为10μg/ml,可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。

    ● 贮存:

    -20℃避光保存,一年有效。

    ● 操作步骤:

    悬浮细胞染色

    1.1 500 g(2400 rpm,下同)离心收集细胞样品于1.5 ml离心管内,加入0.5 ml固定液(货号:KA5010,卡诺固定液),缓缓悬起细胞,常温固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

    1.2离心去尽固定液,用PBS洗两遍,每次3分钟,洗涤期间手动晃动数次。

    1.3 细胞沉淀中加入200 μl DAPI染色液,重悬细胞,37℃避光染色10-15分钟,手动晃动数次。

    1.4 离心收集沉淀,重悬于100 μl 1×PBS中。

    1.5 取5 μl抗荧光淬灭封片液(货号:AM0510)于载玻片上,加入等体积步骤1.4染色后细胞重悬液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。

    1.6 荧光显微镜下紫外激发观察可检测到呈蓝色的细胞核。

    注:荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

    贴壁细胞染色

    2.1 取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用无菌的PBS洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,生长至50%-80%满度。

    2.2刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5 ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

    2.3去尽固定液,用PBS洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。

    2.4加入0.5 ml DAPI染色液,37℃避光染色10-15分钟,手动晃动数次。

    2.5去尽染色液,用PBS洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。

    2.6滴一滴抗荧光淬灭封片液(货号:AM0510)于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片液,尽量避免气泡。

    2.7荧光显微镜下紫外激发观察可检测到呈蓝色的细胞核。

    注:荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测

    实验示例:


    操作流程:使用不同浓度星饱菌素(Staurosporine,STS)凋亡处理Jurkat细胞。调整细胞密度为1×106/ml,每孔2 ml接种于六孔板中;加入终浓度为0,0.1,0.5,1 μM STS,37℃ 5%CO2培养3小时;500 g 3 min收集细胞;细胞沉淀中加入1 ml固定液,常温固定10 min;1×PBS漂洗两次;细胞沉淀中加入0.5 ml DAPI染色液,37℃避光染色10 min;离心后细胞沉淀重悬于100 μl 1×PBS中;取5 μl细胞悬液滴于载玻片上,加5 μl 抗荧光淬灭剂,封片观察。

    凋亡细胞由于染色质固缩,细胞核呈致密浓染或碎块状致密浓染。细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学变化分三期:I期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased)(0.1 μM STS处理),部分染色质出现浓缩状态(0.5 μM STS处理)。II a期细胞核的染色质高度凝聚,边缘化;II b期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体(1 μM STS处理)。




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