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HE1013S Hochest 33342即用型染色液
 产品货号: HE1013S
 产品名称: HE1013S Hochest 33342即用型染色液
 产品价格/规格: 10ml 150元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2022-08-03
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  • Hochest 33342即用型染色液

    Hochest 33342 Stain RTU Solution,10 μg/ml

    ●  产品组成:

    货号

    名称

    规格

    贮存

    HE1013S

    Hochest 33342即用型染色液

    10 ml

    -20

     

    说明书

    一份

     

    ● 产品简介:

    Hoechst 33342,也称bisBenzimide H 33342 或HOE 33342,分子式为C27H28N6O·3HCl ,分子量MW561.93,CAS: 23491-52-3,是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。Hoechst 33342 专一性地与双链DNA结合(优先结合AT),常用于细胞核染色。染色后可以用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342 的最大激发波长为346 nm(紫外激发),最大发射波长为460nm(蓝色荧光);Hoechst 33342 和双链DNA 结合后,最大激发波长为350nm,最大发射波长为461nm。另外,由于Hoechst 33342专一性结合DNA,不与RNA结合,样品无需使用RNase处理。与DAPI相比,Hoechst 33342具有更好的膜通透性,更适合于活细胞的染色。

    Hoechst 33342和Hoechst 33258相比,Hoechst 33342对细胞的毒性作用更小一些,33258穿透能力较33342弱,染活细胞时容易被"泵出",也就是拒染。所以一般来说Hoechst 33258用于细胞固定后再染色,而Hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色。

    本染色液为即用型,浓度为10 μg/ml,可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色,也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

    贮存:

    -20℃避光保存,一年有效。

    ● 操作步骤:

    .固定后的细胞样品染色:

    1.1 贴壁细胞:

    1.1.1 取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用无菌的PBS洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,生长至50%-80%满度。

    1.1.2刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5 ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

    1.1.3去尽固定液,用PBS洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。

    1.1.4加入0.5 ml Hoechst 33342染色液,37℃避光染色10-15分钟,手动晃动数次。

    1.1.5去尽染色液,用PBS洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。

    1.1.6滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片液,尽量避免气泡。

    1.1.7 荧光显微镜使用紫外激发,可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右,发射波长460nm左右。

    注:荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

    1.2悬浮细胞:

    1.2.1 500 g(2400 rpm,下同)离心收集凋亡处理后细胞样品于1.5 ml离心管内,加入0.5 ml固定液,缓缓悬起细胞,常温固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

    1.2.2离心去尽固定液,用PBS洗两遍,每次3分钟,洗涤期间手动晃动数次。

    1.2.3 细胞沉淀中加入0.5 ml Hoechst 33342染色液,37℃避光染色10-15分钟,手动晃动数次。

    1.2.4 离心收集沉淀,重悬于100 μl PBS中。

    1.2.5 取5 μl抗荧光淬灭封片液于载玻片上,加入等体积步骤1.2.4染色后细胞重悬液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。

    1.2.6 荧光显微镜下紫外激发,可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350 nm左右,发射波长460 nm左右。

    注:荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

    .活细胞染色:

    2.1 加入适当量Hoechst 33342染色液,必须充分覆盖住待染色的样品,通常对于六孔板一个孔需加入1 ml染色液,对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。

    2.2 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液,用PBS洗涤2-3次即可进行荧光检测。细胞发生凋亡时,在荧光显微镜下观察会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。

    . 实验示例:



    HeLa细胞染色图。图A为正常细胞Hoehst 33342的染色效果图。图B中除了正常细胞外,还清晰可见呈现致密浓染的凋亡细胞。


    操作流程: Jurkat细胞,计数1×106/ml;500 g 3 min收集2 ml 细胞;细胞沉淀中加入1 ml卡诺固定液,常温固定10 min;1×PBS漂洗两次;细胞沉淀中加入200 μl Hoechst 33342即用型染色液(10 μg/ml);37度避光染色10 min; 离心后细胞沉淀重悬于100 μl 1×PBS中;取5 μl细胞悬液滴于载玻片上,加5 μl 抗荧光淬灭剂,封片观察。


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