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PE1080S Propidium Iodide Staining Solution 碘化丙啶染色液
 产品货号: PE1080S
 产品名称: PE1080S Propidium Iodide Staining Solution 碘化丙啶染色液
 产品价格/规格: 1ml 80元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2022-08-03
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  • 碘化丙啶染色液(Propidium Iodide Staining Solution

    ●  产品组成:

    组分货号

    名称

    规格

    贮存

    PE1080S

    碘化丙啶染色溶液

    1 ml

    -20

     

    说明书

    一份

     

    ● 产品简介:

    碘化丙啶(propidium iodide,PI),分子式C27H34I2N4 ,MW 668.39,CAS:25535-16-4。碘化丙啶不能穿过完整的活细胞膜,即正常细胞和凋亡细胞在不固定的情况下对PI拒染,而坏死细胞由于失去膜的完整性,PI可进入细胞内与DNA结合,根据此特点,使用PI染色可鉴别死细胞。如果使用PI对活细胞染色必须在染色前进行固定,以增加细胞膜对染料的通透性。PI经常被用来与 Calcein-AM 或者 FDA等荧光探针一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。 PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为 535 nm 和615 nm。常用于流式细胞仪分析和显微镜观察,检测细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)。

    本产品为 PI 水溶液,浓度为 1 mg/ml(1.5 mM)。使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。

    ● 贮存:

    -20℃保存,一年有效。

    ● 操作步骤:

    悬浮细胞染色

    1.1 500 g(2400 rpm,下同)离心收集细胞样品于1.5 ml离心管内,加入0.5 ml固定液(货号:KA5010,卡诺固定液),缓缓悬起细胞,常温固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

    1.2离心去尽固定液,用PBS洗两遍,每次3分钟,洗涤期间手动晃动数次。

    1.3 细胞沉淀中加入200μl 1×PBS重悬,加入10 μl 碘化丙啶染色液,37℃避光染色10-15分钟,手动晃动数次。

    1.4 离心收集沉淀,重悬于100 μl 1×PBS中。

    1.5 取5 μl抗荧光淬灭封片液(货号:AM0510)于载玻片上,加入等体积步骤1.4染色后细胞重悬液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。

    1.6 荧光显微镜下观察可检测到呈红色的细胞核。激发波长为535 nm,发射波长为615 nm。

    注:荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

    贴壁细胞染色

    2.1 取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用无菌的PBS洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,生长至50%-80%满度。

    2.2刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5 ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

    2.3去尽固定液,用PBS洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。

    2.4加入0.5 ml PBS,加入25 μl碘化丙啶染色液,37℃避光染色10-15分钟,手动晃动数次。

    2.5去尽染色液,用PBS洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。

    2.6滴一滴抗荧光淬灭封片液(货号:AM0510)于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片液,尽量避免气泡。

    2.7荧光显微镜下观察可检测到呈红色的细胞核。激发波长为535 nm,发射波长为615 nm。

    注:荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

    实验示例:


    操作流程: 胰酶消化液消化,计数2×106/ml

     

    500 g 3 min收集1.3 ml 293细胞,细胞密度2×106/ml;

     

    细胞沉淀中加入1 ml卡诺固定液,常温固定10 min;1×PBS漂洗两次;

     

    细胞沉淀中加入200μl 1×PBS,10 μl碘化丙啶染色液(1mg/ml),

     

    37度避光染色10 min;

     

    离心后细胞沉淀重悬于100 μl 1×PBS中;

     

    取5 μl细胞悬液滴于载玻片上,加5 μl 抗荧光淬灭剂,封片观察。




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